Educación Determinación del tiempo de retención

Decidir las condiciones que se utilizarán para encontrar el tiempo de retención de la columna que se está evaluando. Las condiciones básicas incluyen el tipo de solvente de la fase móvil, tasa de disolvente, tipo de detector y el ajuste y el producto químico específico que se utilizará de flujo. Estas condiciones a veces se pueden encontrar en un método oficial de la prueba existe.



Conectar la columna de HPLC en una bomba de fase móvil, a la entrada de la columna, y para el detector, la salida de la columna.

Encienda los diversos componentes de la HPLC: bomba, detector y adquisición de datos de ordenador.

Llene el tanque con una fase móvil disolvente apropiado e iniciar el flujo de la fase móvil a través de la columna por la bomba.

Preparar u obtener una solución estándar del producto químico utilizado para la prueba. A menudo, estos patrones de calibración se pueden comprar ya hecha. Usted también puede hacer una solución estándar disolviendo una cantidad adecuada de la sustancia en el disolvente de la fase móvil. A menos que usted está siguiendo un método específico que le indique lo contrario, comenzar con una concentración estándar de aproximadamente 50 partes por millón. Esto puede ser aumentado o disminuido con el fin de obtener una salida del detector de pico que es lo suficientemente grande para la integración y lo suficientemente pequeño para mantener un pico de forma simétrica.

Inyectar una cantidad apropiada de la solución estándar en HPLC. Un volumen de aproximadamente 10 microlitros es típico. Al mismo tiempo, comienza la adquisición de datos a través de la computadora.

Siga la salida del detector en la salida del sistema de adquisición de datos de ordenador. Cuando una potencia máxima, espere dos minutos y luego deje de adquisición de datos.

Al utilizar el software de adquisición de datos, para integrar la salida del detector de pico para identificar el producto químico. Desde el software, leer el tiempo de retención en la que se encuentra en el vértice del pico.